Реакція з гетероциклическим аминосоединением
Нінгідринова реакція з пролін є специфічною, особливо в хроматографічних аналізах, так як такого роду структури в кислому середовищі спочатку забарвлюються в жовтий колір, а потім у нейтральній набувають пурпурове забарвлення. Дослідники пояснюють це особливістю перебудови циклу в проміжному з’єднанні, на який впливає саме присутність великої кількості протонів водню, доповнюють зовнішній енергетичний рівень азоту.
Руйнування гетероциклу не відбувається, а інша молекула нингидрина приєднується в ньому по 4-го атома вуглецю. При подальшому нагріванні отримана структура нейтральному середовищі переходить у пурпурний Руэмана (рис.5).
Приготування основного реактиву
Нингидриновую пробу проводять різними розчинами, залежно від розчинення аминоструктур в тих або інших органічних і неорганічних сполуках.
Основним реактивом є приготування 0,2 % розчину у воді. Це універсальна суміш, оскільки більшість сполук добре розчиняються саме в H2O. Щоб отримати свіжоприготований реактив, наважку 0,2 г хімічно чистого нингидрина розбавляють в 100 мл води.
Варто зазначити, що для деяких аналізованих розчинів ця концентрація є недостатньою, тому можуть приготувати 1 % або 2 % розчини. Це характерно для витяжок з лікарської сировини, оскільки в них містяться різні класи аминосоединений.
При проведенні хроматографічних досліджень розчини, наприклад, при промиванні суміші на твердому носії через колонку, можуть готувати на спирту, диметилсульфоксиді, ацетоні та інших полярних розчинниках ‒ все буде залежати від розчинника певних аминоструктур.
