Виконання експерименту
Спочатку необхідно приготувати гель сефадекса, для чого суху його масу 4 м суспендують в надмірній кількості натрій-фосфатного буфера, а потім залишають для набухання протягом 3 діб при н. у. Скляну пластинку зі сторонами 20х40 см ретельно промивають. Перед нанесенням на неї сефадекса буфер над ним декантуют, а потім гель добре перемішують. На горизонтально розташовану пластину його наносять порцелянової ложечкою, а потім розподіляють прокатуванням скляної палички розміром 1х22 див. Прокатування повторюють до рівномірного розподілу шару гелю без грудок і бульбашок товщиною 1 мм Підготовлену пластинку просушують на повітрі 15 хв., а потім поміщають в хроматографічну камеру.
В крайні ємності заливають фосфатний буфер, гель з’єднують з буфером хроматографічної папером. Далі камеру закривають і поміщають на спеціальну підставку. Кут її нахилу встановлюють на 7-10°. Для насичення камеру залишають на ніч.
Розчини білків, молекулярна маса яких відома, так само, як і досліджувані зразки, наносять микропипеткой, обсяг кожної порції повинен бути по 0,02 мл Пластинку повертають у горизонтальне положення і наносять порції білка в певні точки. Відстань між ними і від верхнього краю повинно бути 3 див. Потім камеру закривають і ставлять під кутом 7-10°. Гель-хроматографічний аналіз проводять 4 ч.
Після закінчення відведеного часу камеру ставлять горизонтально, хроматографічну папір видаляють. Скляну пластинку поміщають на підставку в горизонтальному положенні і знімають “репліку” на папір для хроматографії. Для цього її згортають в трубочку і накладають на тонкий гелевий шар, поступово розгортаючи. При цьому папір має пристати до нього, але робити це потрібно акуратно, щоб зберегти його в цілості. Папір залишають на поверхні пластинки 1 хв., після цього висушують при температурі 90 °С 20 хв. і поміщають в спеціальну кювету для фарбування.
